在加入或不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试样品中。用中期分裂象阻断剂（如秋水仙素）处理，使细胞停止在中期分裂象，随后收获细胞、制片、染色、分析染色体畸变。通过检测受试样品诱发体外培养的哺乳动物细胞染色体畸变的能力，从而评价受试样品的致突变性及其强度。中科检测可以开展体外哺乳动物细胞染色体畸变试验。

　　体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法

　　⒈细胞培养与染毒。试验需在加入和不加入S9的条件下进行。试验前一天，将一定数量的细胞接种于培养皿（瓶）中，放C02培养箱内培养。试验时吸去培养皿（瓶）中的培养液，加入一定浓度的受试样品、S9混合液（不加s9混合液时，需用培养液补足）以及一定量不含血清的培养液，放培养箱中，根据细胞周期决定处理2～6小时。

　　结束后，吸去含受试样品的培养液，用Hanks液洗细胞3次，加入含10％胎牛血清的培养液，放回培养箱，于24小时内收获细胞。于收获前2～4小时，加入细胞分裂中期阻断剂（如用秋水仙素，作用时间为4小时，终浓度为1ug/ml)。

　　⒉用0.25％胰蛋白酶溶液消化细胞，待细胞脱落后，加入含10％胎牛或小牛血清的培养液终止胰蛋白酶的作用，混匀，放入离心管以1000～1200r/min的速度离心5～7分钟，弃去上清液。

　　⒊加入0.075mol/LKCl溶液7ml，用滴管将细胞轻轻地混匀，放入37℃水浴中低渗处理7分钟，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸3：1)混匀，以1500r/min速度离心5～7分钟，弃去上清液。

　　⒋加入7ml固定液，混匀后固定7分钟，以1500r/min速度离心7分钟，弃去上清液。用同法再固定1～2次，弃去上清液。

　　⒌加入数滴新鲜固定液，混匀。用混悬液滴片，自然干燥。用吉姆萨染液染色。

　　⒍选择100个分散良好的中期分裂象，在显微镜油镜下进行读片。在读片时应记录每一观察细胞的染色体数目，对于畸变细胞还应记录显微镜视标位置及畸变类型。所有处理组、阳性和阴性对照组均需测定有丝分裂指数。每一剂量组应分析不少于500个分散良好的中期分裂象。

　　体外哺乳动物细胞染色体畸变试验标准

　　《化妆品安全技术规范》(2015年版)第六章9体外哺乳动物细胞染色体畸变试验

　　《化妆品安全技术规范》(2015年版)第六章11哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验

　　消毒剂安全性毒理学评价程序和方法GB/T38496-2020（6.8.3）

　　消毒技术规范（卫生部2002年版）（2.3.8.3）

　　消毒剂安全性毒理学评价程序和方法GB/T38496-2020（6.8.5）

　　消毒技术规范（卫生部2002年版）（2.3.8.5）

　　食品安全国家标准哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验GB15193.6-2014