化学品细菌回复突变试验方法有哪些


化学品细菌回复突变试验,也被称为Ames试验,是一种用来检测化学物质是否具有致突变性(即引起基因突变的能力)的生物学检测方法。该试验由美国科学家布鲁斯·艾姆斯(BruceAmes)在1970年代开发,并已被广泛应用于评估新化学物质(如药物、食品添加剂、农药、化妆品成分等)的致突变潜力。
细菌回复突变试验原理是利用了特定类型的突变菌株,这些菌株携带有特定的基因突变,导致它们不能在没有外源性营养物质的培养基中生长。当将这些菌株暴露于测试化合物中时,如果该化合物具有致突变性,它会诱导这些突变菌株产生基因回复突变,使其重新获得在无外源性营养物质的培养基上生长的能力。因此,通过检测这些回复突变菌株的生长情况,可以评估化合物的致突变性。
化学品细菌回复突变试验方法
平板掺入法:将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内,培养后将融化好的顶层培养基分装于无菌小试管中,加入测试菌株新鲜菌液、试验样品浸提液(或阴性、阳性对照液)以及代谢活化系统(如S9混合物),混匀后倾倒在底层培养基上,培养后观察结果。
预保温法:在加入顶层培养基前,先将受试物和菌液在适宜温度下预培养一段时间,再进行平板掺入操作。
波动法:通过改变培养条件或处理方式来观察基因突变的发生情况。
点试法:将测试菌液和受试物点在无菌滤纸片上,培养后观察结果。
细菌回复突变试验应用范围及对象
细菌回复突变测试广泛适用于不同类型的化学品,可以涵盖工业化学品、农药、药物、食品添加剂等多个领域。
在细菌回复突变试验中,通常选择特定的细菌株作为实验对象,如沙门氏菌、大肠杆菌等。这些细菌株常具有某种突变表型(如缺陷酶活性),当暴露于测试化学物质后,只有那些发生了突变并恢复了正常表型的细胞才能生存下来,并形成可观察到的小落点。
通过统计这些小落点的数量和频率,可以评估化学物质是否引起了细菌的基因突变。该试验被广泛应用于预测化学物质对环境和人类健康的潜在危害,并为毒性评估提供重要参考数据。
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